活化凝血時(shí)間測(cè)定試劑盒（凝固法）HR-ACT Cartridge，402-03
注冊(cè)證編號(hào)：國(guó)械注進(jìn)20172401652
注冊(cè)人名稱：美敦力公司Medtronic Inc.
注冊(cè)人住所：710 Medtronic Parkway N.E., Minneapolis, MN 55432, USA
生產(chǎn)地址：18501 East Plaza Drive, Parker, CO 80134-9061, USA
產(chǎn)品名稱：活化凝血時(shí)間測(cè)定試劑盒（凝固法）HR-ACT Cartridge
管理類別：第二類
活化凝血時(shí)間測(cè)定試劑盒（凝固法）HR-ACT Cartridge，402-03型號(hào)規(guī)格：產(chǎn)品型號(hào)：402-03，產(chǎn)品規(guī)格：50人次/盒。
活化凝血時(shí)間測(cè)定試劑盒（凝固法）HR-ACT Cartridge，402-03結(jié)構(gòu)及組成/主要組成成分：高嶺土、氯化鈣、HEPES緩沖液和疊氮鈉。（具體內(nèi)容詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)）
活化凝血時(shí)間測(cè)定試劑盒（凝固法）HR-ACT Cartridge，402-03適用范圍/預(yù)期用途：該產(chǎn)品用于體外定量測(cè)定全血中活化凝血時(shí)間。 產(chǎn)品儲(chǔ)存條件及有效期：2～25℃保存，有效期為8個(gè)月。
超氧陰離子自由基作為生物體代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸和聚不飽和脂肪酸等，使其交聯(lián)或者斷裂，引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞，與機(jī)體衰老和病變有很密切的關(guān)系，清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。生物體內(nèi)的分子氧可以經(jīng)過(guò)單電子還原轉(zhuǎn)變?yōu)槌蹶庪x子自由基(O2-)，超氧陰離子自由基既可以直接作用于蛋白質(zhì)和核酸等大分子，也可以衍生為羥自由基、單線態(tài)氧、過(guò)氧化氫及脂質(zhì)過(guò)氧物自由基等對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能具有破壞作用的活性氧。
Leagene超氧陰離子自由基檢測(cè)試劑盒(磺胺比色法)又稱超氧陰離子產(chǎn)生速率檢測(cè)試劑盒，其檢測(cè)原理是在酸性條件下，2份O2-與羥胺反應(yīng)生成1份NO2-，NO2-在對(duì)氨基苯磺酸和萘胺的作用下反應(yīng)生成粉紅色的偶氮物質(zhì)，以分光光度計(jì)測(cè)定530nm處吸光度，在一定范圍內(nèi)顏色深淺與O2-成正比，根據(jù)A530及NO2-和O2-的相關(guān)反應(yīng)中物質(zhì)的量的關(guān)系，可算出樣品中O2-的濃度。該試劑盒主要用于測(cè)定植物組織中的超氧陰離子自由基含量或超氧陰離子的產(chǎn)生速率及清除能力。該試劑盒僅用于科研域，不宜用于臨床診斷或其他用途。
活化凝血時(shí)間(ACT)檢測(cè)試劑盒(凝固法)自備材料： 1、蒸餾水
2、實(shí)驗(yàn)材料：植物組織(大豆、綠豆、玉米等葉片)、血液、組織樣本等
3、研缽或勻漿器
4、離心管或試管
5、低溫離心機(jī)
6、恒溫箱或水浴鍋
7、分光光度計(jì)、比色杯 編號(hào) 名稱 TO1123 50T Storage 試劑(A): NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM) 1ml 4℃ 試劑(B): O2- Lysis buffer 125ml 4℃ 試劑(C): 羥胺溶液 30ml 4℃ 試劑(D): 氨基苯磺酸顯色液 30ml 4℃ 避光 試劑(E): 萘胺顯色液 30ml 4℃ 避光 使用說(shuō)明書(shū) 1 份
活化凝血時(shí)間(ACT)檢測(cè)試劑盒(凝固法)操作步驟(僅供參考)：
1、準(zhǔn)備樣品： ①植物樣品：取正�；蚰婢诚碌男迈r植物組織，清洗干凈，擦干，切碎，迅速稱取 1~1.5g， 加入 2ml 預(yù)冷的 O2- Lysis buffer 后冰浴條件下勻漿或研磨，4℃ 10000g 離心 10min， 上清液即為超氧陰離子自由基提取液，4℃保存?zhèn)溆谩?nbsp;②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測(cè) 定，4℃保存，用于超氧陰離子自由基的檢測(cè)。 ③高活性樣品：如果樣品中含有較高濃度的超氧陰離子自由基，可以使用 O2- Lysis buffer 進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?nbsp;
2、配制系列 NO2-標(biāo)準(zhǔn)溶液：取出 NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM)恢復(fù)至室溫后，以 NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM) 按下表繼續(xù)稀釋：
3、O2-加樣：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意 避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的超氧陰離子自由基濃度過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀 釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)好能設(shè)置平行管。
4、O2-測(cè)定：以空白調(diào)零，比色杯光徑 1cm，分光光度計(jì)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管 530nm 處 吸光度(即為 A 標(biāo)準(zhǔn)、A 測(cè)定)。
計(jì)算： 以系列 NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1~6 號(hào))含量(μM)為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲 加入物(ml) 1 2 3 4 5 6 NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM) 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 蒸餾水 0.99 0.98 0.97 0.96 0.95 0.94 NO2-含量(μM) 10 20 30 40 50 60 加入物(ml) 空白管 標(biāo)準(zhǔn)管 測(cè)定管 蒸餾水 1 — — 系列 NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1~6 號(hào)) — 1 — 待測(cè)樣品 — — 0.25 O2- Lysis buffer — — 0.25 羥胺溶液 — — 0.5 混勻，25℃水浴孵育 20min。 氨基苯磺酸顯色液 0.5 0.5 0.5 萘胺顯色液 0.5 0.5 0.5 混勻，30℃水浴孵育 30min。根據(jù)測(cè)定管的吸光度進(jìn)而計(jì)算 NO 2-含量。
根據(jù)如下公式計(jì)算具體樣品中超氧陰離子自 由基(O2-)的含量： 植物組織樣品 O2-(μM/g)=2×n×VT/(W×VS) 血清、尿液等樣品 O2-(μM/ml)=2×n×N/VS 超氧陰離子的產(chǎn)生速率的定義：每分鐘每克鮮重組織產(chǎn)生的超氧陰離子的物質(zhì)的量，計(jì) 算公式如下： 超氧陰離子產(chǎn)生速率【μmol/(min*g)】=2×n×VT/(W×t×VS) 測(cè)得樣品中蛋白質(zhì)含量后，可用下面公式表示： 超氧陰離子產(chǎn)生速率【μmol/(min*mg)】=2×n×VT/(m×t×VS) 式中：2=NO2-與 O2-間的化學(xué)計(jì)量數(shù) n=從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的 NO2-含量(μM) VT=超氧陰離子自由基提取液總體積(ml) N=樣品稀釋倍數(shù) W=樣品鮮重(g) m=樣品中蛋白質(zhì)含量(mg) t=樣品與羥胺的反應(yīng)時(shí)間(min)=20 VS=測(cè)定時(shí)加入提取液體積(ml)
活化凝血時(shí)間(ACT)檢測(cè)試劑盒(凝固法)注意事項(xiàng)：
1、 實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用，應(yīng)存于 4℃。
2、 如果樣品中含有較多的葉綠素，會(huì)干擾測(cè)定結(jié)果，可在加入羥胺溶液 25℃水浴孵育 20min 后用等體積三氯甲烷萃取葉綠素，再行顯色反應(yīng)。
3、 如果沒(méi)有分光光度計(jì)，也可以使用普通的酶標(biāo)儀測(cè)定，但應(yīng)考慮酶標(biāo)儀的大檢測(cè)體積。
4、 所測(cè)樣本的濃度過(guò)高，應(yīng)用 O2- Lysis buffer 稀釋樣品后重新測(cè)定。
5、 氨基苯磺酸顯色液和萘胺顯色液有強(qiáng)烈的刺激性，盡量在通風(fēng)條件好的地方操作，用后 需擰緊瓶蓋，避免揮發(fā)。
有效期：6 個(gè)月有效。4℃運(yùn)輸，4℃保存。
活化凝血時(shí)間(ACT)檢測(cè)試劑盒(凝固法)相關(guān)產(chǎn)品： 附：參考標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍： Leagene 測(cè)定 NO2-標(biāo)準(zhǔn) 10、20、40、60、80、100、120、140、160、180、200μM 在 530nm 的吸光度，據(jù)此做出其標(biāo)準(zhǔn)曲線如下： 根據(jù)結(jié)果可以看出 NO2-標(biāo)準(zhǔn)在 160μM 以上時(shí)，OD 值會(huì)有偏差，因此樣品的 O2-應(yīng)小于 320μM
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